Lumafluor Green RetroBeads

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原始、可靠的熒光示蹤劑

luma fluor/Green retro beads IX(100 l)luma fluor是Lumafuor公司的第一個反向示蹤產品，也是一個被證明有效的產品(該產品的有效性已被數百篇從無脊椎動物到哺乳動物實驗的研究論文所證實)。

該示蹤劑產品在體內注射時濃度高，不易擴散，信號強，對活細胞或活體無毒，存活時間在一年以上。它與以下大多數示蹤劑、原位雜交檢測技術和免疫組織化學技術兼容。

Further details are presented in: Katz, L.C., Burkhalter, A., and Dreyer, W.D. Fluorescent latex microspheres as a retrograde neuronal marker for in vivo and in vitro studies of visual cortex. Nature 310: 498-500 (1984), and Katz, L.C. and Iarovici, D.M. Green fluorescent latex microspheres: a new retrograde tracer. Neuroscience 34: 511-520 (1990).

熒光乳膠微球的使用方案 

如何供應:封閉的小瓶含有懸浮在蒸餾水中的珠子的濃縮溶液。如果紅色珠子用于神經元路徑的逆行追蹤，溶液可以原樣使用，或者稀釋。在大鼠視覺皮層中，當使用紅色珠子時，1:4的稀釋度似乎不會降低逆行標記的質量或程度。然而，對于初始實驗，我們強烈建議使用全強度的溶液。除蒸餾水外，標準鹽溶液(NaCl，KCl)也可用作稀釋劑。所提供的綠珠*全為逆行追蹤實驗做好了準備。不建議稀釋綠珠。

存儲:珠溶液應儲存在冰箱中的加濕容器中，以防止蒸發(fā)。不要凍結！被冰凍的珠子將不起作用，并且不能被解救。如果珠子變干，它們就不能被重組。這種材料沒有規(guī)定保存期限，但是，如果儲存得當，可以保存幾年。

應用:最好使用壓力注射珠子(例如，1 ml Hamilton注射器，或加壓空氣注射系統(tǒng))。對于局部回路工作，已經通過具有30-50 μm直徑吸頭的玻璃移液管注入了非常小的體積(30-50 nl)。對于常規(guī)逆行追蹤，使用更大體積(0.1-0.3 ul)和更大直徑的移液器吸頭。然而，即使注射量很大，珠子也不會從注射部位擴散很遠(通常小于1 mm)。因此，為了標記投射到大結構的所有或大部分神經元，應該進行幾次注射。不推薦將珠的離子電滲應用作為遞送示蹤劑的有效手段。然而，珠子確實有一個凈負電荷。

生存時間:在大多數溫血脊椎動物系統(tǒng)中，注射后的最短有效存活時間約為24小時。標記強度隨著存活時間的延長而增加，最長可達48小時。48小時后，沒有觀察到標記強度的增加(或減少)。這些值在冷血動物中可能有相當大的不同，建議初始存活時間為一周。最大存活時間尚未確定，但即使在14個月的存活時間后，標簽在質量或程度上也沒有變化。細胞可能會被*久標記。未觀察到對動物或神經元的毒性作用。

定影和處理:標準固定是用0.1 M磷酸鹽緩沖液洗滌，然后用0.1 M磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中的4%多聚甲醛洗滌。戊二醛會產生大量的組織自體熒光，這可能會模糊珠標記的神經元，如果可能，應避免使用。綠珠在戊二醛固定材料中全看不見。冷凍切片收集在磷酸鹽緩沖液中，固定在明膠包被的載玻片上，風干。*全干燥后，載玻片可在二甲苯中清洗1分鐘，蓋上涂有Fluoromount或Krystalon的蓋子。Fluoromount可從Atomergic Chemetals Corp .，Farmingdale，NY獲得；Krystalon來自新澤西州吉布森鎮(zhèn)的Harleco (EM Industries)。

短暫接觸酒精和二甲苯不會造成傷害，但長時間接觸(超過5分鐘)會破壞珠子。珠子對甘油非常敏感，如果放在含甘油的溶液中會迅速褪色。在需要非*久性清潔/固定劑的情況下，水楊酸甲酯優(yōu)于甘油。如果載玻片保存在暗處，細胞中的標記至少在一年內不會褪色(盡管背景自發(fā)熒光可能會顯著增加)。迄今為止，在塑料包埋后保留珠標記的嘗試尚未成功。

觀察:紅色珠子中的染料是羅丹明，因此可以使用任何為羅丹明設置的熒光濾光片。一些較舊的尼康羅丹明濾鏡組給出了非常高的背景，這可以使標記的細胞不可見。Zeiss和Leitz標準羅丹明濾光片均獲得了良好的效果。對于綠珠，寬帶熒光素濾光器效果很好。黃色濾鏡組給出了更強烈的信號，但代價是更高的背景。窄帶熒光素濾光器將給出比寬帶濾光器弱得多的信號。

即使經過長時間的觀察或顯微攝影，珠子也不會明顯褪色。

對于低倍率、低數值孔徑的干燥物鏡(如X4、X10)，標簽通常不可見。如果細胞被強烈標記，X10浸沒物鏡(數值孔徑為0.4或更大)或更高功率的干物鏡通常會顯示細胞。然而，X25浸沒物鏡通常會非常清晰地顯示出低倍率物鏡所遺漏的標記細胞。這些警告對于綠珠來說尤其如此。在決定實驗無效之前，用浸沒物鏡檢查注射部位附近的切片。應該存在大量局部標記的細胞。

綠珠用戶的附加信息:在迄今為止所做的工作中，年輕的動物似乎比年老的動物更好地傳遞標簽。此外，年輕動物的組織自體熒光較低。因此，在涉及綠珠的實驗中，如果可能的話，最好使用較年輕的動物。

因為綠珠在比紅珠更短的波長下被激發(fā)，組織自體熒光是一個更大的問題。因此，將自發(fā)熒光最小化的努力將產生更好的對比信號。減少自體熒光的方法包括:1)使用更薄的切片(例如30 um而不是40或50 μm)；2)使用更年輕的動物，以及3)在蓋玻片后立即檢查切片(背景隨著時間推移而增加)。

相關產品信息：

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