PepMute™ siRNA Transfection Reagent  產(chǎn)品型號：SL100566

pep mute siRNA轉(zhuǎn)染劑由模擬病毒細(xì)胞穿透肽(CPPs)配制而成，是一種全新的siRNA遞送工具，在各種哺乳動物細(xì)胞中，1 nM siRNA下的沉默效率超過95%. 利用我們專有的肽模擬技術(shù)(PST ),數(shù)百種病毒CPP被模擬、合成，并在各種哺乳動物細(xì)胞中篩選基因遞送功效(圖1)。PepMute試劑隨后被鑒定和驗(yàn)證為濃縮和轉(zhuǎn)染短(100 bp以下)單鏈或雙鏈核酸的特別有效的載體是這樣的作為siRNA，miRNA模擬物和DNA寡聚物廣泛應(yīng)用于哺乳動物細(xì)胞。


圖一。一部表現(xiàn)侏儒的卡通片siRNA轉(zhuǎn)染試劑由PST開發(fā)

尺寸:
- PepMute試劑，1.0 mL，足以用于約1，333個(gè)反應(yīng)，基于在24孔板中轉(zhuǎn)染0.5~5.0 pmol siRNA或miRNA模擬物
-活力Mute轉(zhuǎn)染緩沖液(5x)， 針對最大轉(zhuǎn)染效率配制8.0毫升5x濃縮儲備液，制成40毫升工作溶液

應(yīng)用:
- siRNA miRNA模擬物或mRNA轉(zhuǎn)染
- DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染
- DNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染

存儲:
在4°C下儲存，用于胃蛋白酶抑制劑PepMute轉(zhuǎn)染緩沖液的試劑和RT(5倍)。如果儲存得當(dāng)，該產(chǎn)品可穩(wěn)定儲存12個(gè)月或更長時(shí)間。

優(yōu)勢:
-在最終的1.0納米siRNA下具有出色的靜音性能
-多種細(xì)胞中超過95%的基因沉默
-一管反應(yīng)，簡單的標(biāo)準(zhǔn)方案
-與血清和抗生素相容
-適用于HTS的協(xié)議
-極低的細(xì)胞毒性
-非常實(shí)惠

PepMute siRNA轉(zhuǎn)染劑和品牌產(chǎn)品之間的功效比較

圖二。在HEK293細(xì)胞中，使用1.0升PepMu，可以很好地沉默內(nèi)源性表達(dá)的KIF11(也稱為EG5)24孔板的每個(gè)孔中含有te試劑和0.5皮摩爾EG5 siRNA。 KIF11(也稱為EG5)編碼 一種運(yùn)動蛋白，屬于 驅(qū)動蛋白樣蛋白家族參與細(xì)胞有絲分裂期間染色體定位和雙極紡錘體形成。KIF11水平的降低導(dǎo)致有絲分裂停滯。PepMute試劑有效地將EG5 siRNA(最終1.0 nM)遞送至HEK293細(xì)胞，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染后48小時(shí)HEK293細(xì)胞的“聚集"表型超過陰性對照(使用假EG5 siRNA的最終1.0 nM)的80%，同時(shí)優(yōu)于siRNA轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine RNAi max(RNAi max，1.0nM EG5 siRNA)/INTERFERin(1.0nM EG5 siRNA)/Dharmafect(10.0nM EG5 siRNA)和jetPRIME (20 nM EG5 siRNA)轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，用尼康顯微鏡觀察(上圖)并定量(下圖)293細(xì)胞的表型。


圖3。PepMute轉(zhuǎn)染劑(上圖)與Dharmafect 4(中圖)和Lipofectamin的沉默效率比較eA549細(xì)胞上的RNAiMAX (RNAiMAX，下圖)siRNA轉(zhuǎn)染試劑。按照制造商的方案，通過上述三種轉(zhuǎn)染試劑，將靶向0.5-20nm不同終濃度的海腎螢光素酶的siRNA與海腎螢光素酶基因(每孔0.5g pRL-CMV DNA)共轉(zhuǎn)染到生長在24孔板中的A549細(xì)胞中。 用海腎螢光素酶測定系統(tǒng)(Promega)在共轉(zhuǎn)染后36小時(shí)測定海腎螢光素酶活性。發(fā)光瓦用光度計(jì)(Beckman Coulter LD 400)在10s積分期間從5.0 l裂解物中測量。熒光素酶活性表示為10秒內(nèi)積分的光單位(RLU ),并標(biāo)準(zhǔn)化為每毫克通過BCA分析來檢測細(xì)胞蛋白。誤差條代表從三次實(shí)驗(yàn)中得出的標(biāo)準(zhǔn)偏差。熒光素酶相對于未處理的細(xì)胞計(jì)算硒沉默效率。在…期間PepMute和Dharmafect 4試劑從1.0 nM的海腎螢光素酶siRNA中產(chǎn)生顯著的基因沉默，lipofectamine RNAiMAX僅在20 nM后產(chǎn)生良好的敲除，而在低濃度siRNA(分別為0.5和1.0 nM)下觀察到增強(qiáng)的基因表達(dá)。



圖4。PepMute轉(zhuǎn)染試劑通過分別反向轉(zhuǎn)染5.0和1.0 nM GFP siRNA，敲低了MCF7細(xì)胞(上圖)和U2OS細(xì)胞(下圖)中穩(wěn)定的GFP表達(dá)。 綠色熒光蛋白在MCF7和U2OS細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。將靶向GFP基因的siRNA(右圖)和假siRNA(左圖)分別以最終的5.0和1.0 nM導(dǎo)入MCF7和U2OS細(xì)胞 使用PepMute轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行反向轉(zhuǎn)染。綠色熒光蛋白通過尼康熒光顯微鏡在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)監(jiān)測基因沉默。定量分析表明由pep mute siRNA轉(zhuǎn)染劑遞送的5.0和1.0 nM的GFP siRNA分別敲除MCF7和U2OS細(xì)胞中90%和95%穩(wěn)定表達(dá)的GFP。

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