MagVigen™ Streptavidin Conjugates Kit

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MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆?？梢云毡榻Y(jié)合任何生物素化的生物分子(例如抗體、蛋白質(zhì)、肽、DNA)。MagVigen鏈霉親和素-生物素-生物分子復(fù)合物可使用磁性架(目錄號A20006)與未結(jié)合的生物素-生物分子輕松分離。這提供了一種用磁性納米粒子標(biāo)記生物分子的快速而簡潔的方法。純化的納米粒子-生物分子復(fù)合物可用于多種下游生物分離過程(例如蛋白質(zhì)純化、免疫沉淀、細(xì)胞分離或去除以及分子檢測。)

MagVigen鏈霉親和素理想地與小鼠抗體一起用于從獲自組織或器官的細(xì)胞群體混合物中分離細(xì)胞(例如CTCs、干細(xì)胞)。分離的細(xì)胞是活的，可以進(jìn)一步培養(yǎng)或用于下游分子分析，如mRNA分離和RT-PCR。使用MagVigen納米顆粒進(jìn)行細(xì)胞分離無需使用色譜柱，因此細(xì)胞不會因通過色譜柱基質(zhì)而受到機(jī)械應(yīng)力的影響。磁性分離的細(xì)胞高度純化，并保持其活力，是下游應(yīng)用的理想選擇。

mag vigen–鏈霉親和素用于細(xì)胞富集的優(yōu)勢

• 簡單快速地制備納米顆粒-初級小鼠抗體綴合物
• 簡單溫和的細(xì)胞分離
• 強(qiáng)而持久的熒光信號
• 一致的高質(zhì)量結(jié)果
• 高結(jié)合能力
• 高生物相容性
• 低非特異性結(jié)合

產(chǎn)品內(nèi)容

• cat # 21005 c:MagVigen-鏈霉親和素在含0.02% NaN3和0.02% BSA的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中提供。pH 7.4。每個小瓶包含1毫升的溶液，其顆粒濃度為2毫克/毫升，這足以結(jié)合10個

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  細(xì)胞。

納米粒子尺寸:使用動態(tài)光散射測量的200-500納米。
多分散指數(shù) < 0.2.

容量:50微克生物素抗體/毫升納米顆粒

Cat# K21005C還包括:

• 洗滌緩沖液
• 洗脫緩沖液

除磁鐵外的所有材料都應(yīng)儲存在4°c下。

保質(zhì)期:6個月

草案

細(xì)胞富集

該協(xié)議提供了濃縮10的一般指南5 -106使用MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒的細(xì)胞。請根據(jù)具體應(yīng)用調(diào)整試劑的量。

1. 使用前，輕輕渦旋或吸取小瓶中的MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒。




2. 等份20-50 μl納米粒子溶液用于富集實(shí)驗(yàn)。

注意: 20-50 μl通常足以富集105 -106細(xì)胞。細(xì)胞捕獲效率可受多種因素影響，例如細(xì)胞群體中靶細(xì)胞的頻率、細(xì)胞表面表達(dá)的抗原/表位的密度以及抗體親和力。相應(yīng)地調(diào)整納米顆粒的量。

3. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在試管側(cè)面1-2分鐘，將納米顆粒從溶液中分離出來，并小心去除上清液(磁鐵仍在側(cè)面)。




4. 向納米顆粒中加入1μg-2μg生物素偶聯(lián)的抗體(體積為100- 200 μl ),并在旋轉(zhuǎn)器上孵育30-60分鐘。

注意: 50 μl納米粒子可以結(jié)合約2μg抗體。

5. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結(jié)合的抗體。




6. 將納米顆粒-抗體綴合物重新懸浮于洗滌緩沖液(50 μl)中，并將其添加至細(xì)胞樣品，總體積為0.1-0.5 ml。




7. 在室溫下，將納米顆粒與細(xì)胞樣品在軌道振蕩器上孵育30分鐘。




8. 孵育后，使用磁鐵將納米顆粒(與細(xì)胞結(jié)合)從溶液中分離出來，并小心去除上清液。




9. 用500μl細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌納米顆粒-細(xì)胞復(fù)合物兩次。




10. 分離的細(xì)胞可以重新懸浮在細(xì)胞培養(yǎng)基中用于下游應(yīng)用。

注意: 洗脫緩沖液可用于從MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒中洗脫目標(biāo)蛋白質(zhì)或細(xì)胞。

免疫沉淀

MagVigen納米顆粒可通過免疫沉淀分析鑒定新的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，其中MagVigen鏈霉親和素生物素-抗體復(fù)合物可用于從分析樣品(如細(xì)胞裂解物)中分離特定的目標(biāo)蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物。免疫沉淀的蛋白質(zhì)可以通過電泳、蛋白質(zhì)染色和質(zhì)譜進(jìn)一步分析。MagVigen納米顆粒比傳統(tǒng)微珠小得多。這一特征使得納米顆粒更容易接近抗原表位，并且對蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物的天然功能干擾更少。此外，MagVigen納米顆粒的表面經(jīng)過涂層處理，可減少與細(xì)胞蛋白質(zhì)和其他生物分子的非特異性相互作用。該特征允許更具體地“下拉"真實(shí)蛋白質(zhì)復(fù)合物靶。

納米粒子清洗

為了獲得納米顆粒的最佳結(jié)果，建議在添加到樣品之前清洗納米顆粒。

1. 渦旋MagVigen納米顆粒10-20秒。




2. 取50μl納米粒子溶液，加入到100μl 1X洗滌緩沖液中，渦旋混合。




3. 將磁鐵放在試管側(cè)面2-5分鐘，將納米顆粒從溶液中分離出來，并小心除去上清液(磁鐵仍在側(cè)面)。

注意: 在微量離心管的側(cè)面應(yīng)該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉淀物。

4. 清洗納米顆粒2次。

免疫沉淀

5. 向含有細(xì)胞裂解物的試管中加入2 μg生物素抗體(或按照公司方案推薦的量)。




6. 在冰上孵育一小時。




7. 向試管中加入50μl預(yù)洗的MagVigen納米顆粒。在4°c下旋轉(zhuǎn)2小時




8. 用磁鐵將納米顆粒從樣品溶液(細(xì)胞裂解物)中分離出來。去除上清液。




9. 用所用的50μl裂解緩沖液洗滌納米顆粒3次。




10. 最后一次清洗后，去除上清液，并向珠子中加入100μl洗脫緩沖液。




11. 渦旋并孵育5分鐘。




12. 從溶液中磁性分離納米粒子。收集上清液，同時避免干擾珠粒。目標(biāo)蛋白質(zhì)存在于上清液中，準(zhǔn)備進(jìn)行分析。

外來體隔離

1. 使用前，輕輕渦旋或吸取小瓶中的MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒。




2. 等份50 μl納米粒子溶液用于富集實(shí)驗(yàn)。

注意: 50 μl通常足以富集1-10×105外來體。外來體捕獲效率可受多種因素影響，例如樣品中外來體的頻率、外來體表面表達(dá)的抗原/表位的密度以及抗體親和力。相應(yīng)地調(diào)整納米顆粒的量。

3. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在試管側(cè)面1-2分鐘，將納米顆粒從溶液中分離出來，并小心去除上清液(磁鐵仍在側(cè)面)。




4. 向納米顆粒中加入500 ng生物素偶聯(lián)的抗體(體積為100-200 μl ),并在旋轉(zhuǎn)器上孵育30-60分鐘。

注意: 50 μl納米顆?？梢越Y(jié)合約200 ng的抗體。

5. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結(jié)合的抗體。




6. 將納米顆粒-抗體綴合物重新懸浮于洗滌緩沖液(50 μl)中，并將其添加至細(xì)胞樣品，總體積為0.1-0.5 ml。




7. 在2°C±8°C的溫度下，將納米顆粒與預(yù)富集的外來體樣品在軌道振蕩器上孵育2小時或過夜




8. 孵育后，用磁鐵將納米顆粒(結(jié)合有外來體)從溶液中分離出來，小心除去上清液。




9. 用500μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-外來體復(fù)合物。




10. 外來體結(jié)合的納米顆?，F(xiàn)在準(zhǔn)備用于外來體裂解、凝膠電泳和蛋白質(zhì)分析。

MagVigen™ Streptavidin Conjugates Kit