脂蛋白酯酶（LPL）測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

脂蛋白酯酶是脂肪細胞、心肌細胞、骨骼肌細胞、乳腺細胞及巨噬細胞等實質細胞合成的一種酶，可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯，以供組織氧化供能和貯存，并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。

測定原理

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配制    

試劑一：液體105mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體4mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

樣品處理

1. 組織：按照質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。

2. 細胞：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。

3. 血清：直接測定。

測定操作

計算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.0581x -0.0169，R2=0.9982

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.0581×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 17.21×（△A+0.0169）÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 17.21×（△A+0.0169）÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每104個細胞每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

                                        = 17.21×（△A+0.0169）÷細胞數量

4．按照液體體積計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷V樣÷T

                                 = 17.21×（△A+0.0169）

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，10min

b．用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.029x -0.0169，R2=0.9982

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.029×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 34.42×（△A+0.0169）÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.029×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 34.42×（△A+0.0169）÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每104個細胞每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

                                        =34.42×（△A+0.0169）÷細胞數量

4．按照液體體積計算

酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產生1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.029×V反總÷V樣÷T

                                 = 34.42×（△A+0.0169）

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，10min

注意事項

1. 試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測定，否則影響吸光值。

2. 吸光值過高或者測定結果不穩(wěn)定，則將酶液進行適當的稀釋，并在計算公式中乘以稀釋倍數。

上海牧榮生物科技有限公司

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